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重組腸激酶
日期:2021-11-11    瀏覽次數:

重組腸激酶


- 產品簡介


      腸激酶(Enterokinase, EK)是一種高度專一性識別 Asp-Asp-Asp-Asp-Lys 序列的蛋白酶,在 Lys 的 C 端水解多肽。具有高度專一性,水解效率高的特點??稍谳^寬的 pH 范圍(4.5~9.5)和較寬溫度范圍內有效切割 融合蛋白??沙ノ挥诘鞍踪| N-末端的融合蛋白,以除去不需要的融合標簽。 冀百康重組腸激酶采用重組畢赤酵母高效分泌表達技術,經多級層析純化,制成的高純度、高活性重組牛 腸激酶,不含其他蛋白酶。


   - 產品優勢

|無動物源性:無動物病毒、無致病物質、無外源因子污染,安全性高。 

|純度高,比活高。 

|生產規模 1000L 以上。 

|合規性:生產設備和生產環境符合相關法規要求,符合 GMP 指導原則。 

|質量文件完整:按客戶需求,可提供相關法規支持文件。



- 產品特性


性狀

淡黃色、無色澄明液體

酶活性

≥5.0U/μl

ph值

7.0-9.0

純度 單一主條帶
電泳 25.8±2.6 kDa
宿主蛋白殘留
≤100ng/mg pro.
外源性 DNA 殘留 ≤100ng/mg pro.

酶活定義:在 25℃,12~16 小時內,將 0.5mg 保存于 25mM Tris-HCI pH 8.0 

緩沖液中的融合蛋白切割 95%所需的酶量為 1U。



- 使用方法

【25℃酶切條件為】25mM Tris-HCl PH8.0 體系中融合蛋白 0.1-1mg/ml(蛋白總量 50-100μg),重組 EK 0.1~0.2U,酶切 16~24 小時,用 SDS-PAGE 檢測酶切效果。 

【4℃酶切條件為】可在 4℃對底物進行有效低溫酶切,但需要將酶切時間延長至 48~64 小時,或增加 2-3 倍酶量。低溫酶切有時候可獲得比 25℃更好的酶切效果。 ? 在>200mM 咪唑,或>200mMNaCl,或>5%甘油,酶切效果受影響??蓞⒄找韵峦扑]方法進行酶切: 1) 為獲得理想酶切結果,請將樣品透析到 25mM Tris-HCl pH 8.0 緩沖液中,再進行酶切; 2) 若不便透析,可將樣品稀釋,咪唑含量在 100mM 以下,NaCl 濃度在 50mM 以下,甘油濃度小于 5%以下進行酶切,酶的用量與蛋白的比例不變(即 1U 酶切 500μg 蛋白); 3) 如果樣品溶液中含有上述成分的一種或多種,且不便去除,此時適當增加酶量或延長酶切時間,也可 達到較好酶切效果。 

可對酶切條件進行優化,例如緩沖液 pH,融合蛋白濃度,EK 的量,以及酶切時間,融合蛋白能在穩定條 件下被酶切,用 SDS-PAGE 檢測酶切效果。 

去除重組腸激酶的辦法:可使用胰蛋白酶抑制劑親和層析去除重組腸激酶。 注意:不建議 37℃條件下酶切,可能會有非特異性酶切出現。




- 運輸及穩定性

運輸穩定性:冰袋運輸,活性穩定。

儲存穩定性:-15℃及以下,24 個月穩定,25℃,一周內無活性損失。緩沖體系:50mM Tris-HCl,pH8.0,
250mM NaCl,2mMCa2+,50%甘油。

凍融穩定性:反復凍融 5 次,無活性損失。

本品僅供研究使用,不得用于動物或人類的診斷或治療。









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