- 產品簡介
胰蛋白酶是一種絲氨酸蛋白酶，能選擇地水解蛋白質中由賴氨酸或精氨酸的羧基末端所構成的肽鏈。本品是從重組畢赤酵母中分離純化，再經冷凍干燥得到的重組胰蛋白酶粉末。本品屬于細胞培養級基因工程酶，不含DFP、PMSF和TLCK等酶抑制劑，具有天然胰蛋白酶相同的活性和特異性。本品活性受絲氨酸蛋白酶抑制劑如PMSF和TLCK等、金屬離子螯合劑如EDTA等的抑制。
- 產品優勢
- 產品特性
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性狀 |
白色或類白色凍干粉 |
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分子量 |
23.5KD±2.4KD |
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純度 |
≥95%（SDS-PAGE） |
| HPLC純度 |
α-胰蛋白酶不得大于20%； β-胰蛋白酶不得小于70%， |
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外源DNA殘留量 |
≤100ng/mg pro. |
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菌體蛋白殘留量 |
≤100ng/mg pro. |
| 最佳pH | 7.0-9.0 |
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溶解性 |
在水或緩沖液中可溶 |
酶活定義： 25℃，pH7.6，反應體系 3.0ml (1cm 光路)，
每分鐘酶解 BAEE 使 253nm 下的吸收值增加 0.003 定義為一個 USP
- 產品說明
酶抑制劑：本品不含 DFP，PMSF，TLCK 等酶抑
- 反應規程
蛋白質的準備：
將蛋白質溶解在 25mM Tris-HCl，pH9.2 的溶液中。溶解性低或者需要變性處理的蛋白質可以用最小體積的 變性劑，如 8M 尿素或 6M 鹽酸胍，在室溫~37℃條件下孵育 1h 使之溶解。需要做二硫鍵還原處理的蛋白質 可以加入終濃度為 5mM 的 DTT 或β-巰基乙醇，于 50~60℃孵育 20 分鐘使之溶解。調整反應溶液體積使 Tris-HCl 為 25mM，尿素為 1M 或更低，鹽酸胍為 0.1M 或更低。
酶液準備：
稱取所需的酶粉，用適量緩沖液溶解即得。
消化反應：
1g 多肽或蛋白質推薦酶的用量在 1~100AU 之間。推薦于-15℃及以下反應 2~18h。
如果需要終止反應，可以加入乙酸或鹽酸調節 pH 至酸性。
【注意】
為了獲得最佳的酶切效果，通常需要蛋白處于可溶、變性和二硫鍵還原的狀態，否則需要加大酶用量。應嚴格控制鹽酸胍和尿素的加入量，尿素高于 1M 或鹽酸胍高于 0.1M 將會降低重組賴氨酰內切酶的活力。
- 運輸和儲存穩定性
運輸穩定性：冰袋保溫運輸，活性穩定。
儲存穩定性：凍干粉在-15~-20℃條件下至少能穩定存放24個月。1mM鹽酸或50mM醋酸溶解后儲存于-15~-20℃，反復凍融10次，無活性損失。溶解后 2~8℃保存建議不超過7天 ，溶解后-15~-20℃ 保存建議不超過30天 。
- 注意事項和免責聲明
|本品具有吸潮性，應室溫平衡后再取用。
|本品不得用于臨床診斷和治療。
